Aspecto: polvo blanco, fino, no higroscópico, uniforme, libre de grumos o de impurezas visibles, de color blanco o blanco ligeramente grisáceo, inodoro y con un sabor  fuertemente amargo. El sabor desaparece en pocos minutos debido a la anestesia de la mucosa oral. 

Color de la solución (Farmacopea Europea 1997): 
Solución problema: Disolver 1.0 g de muestra en 50 ml  de agua desionizada. 
Solución B: 3.0 ml de solución amarilla + 3.0 ml de solución roja + 2.4 ml de solucíón azul + 1.6 ml de HCl 10 g/l (1%: 2.7 g de HCl 37% en 10 ml de agua) . 
Solución B₉ : 1.0 ml de solución B en 99 ml de HCl 10 g/l. 

La solución problema debe tener el mismo aspecto que el agua y no debe mostrar un color más intenso que el de la solución B_9. 

Opalescencia (Farmacopea Europea 1997) 
Solución problema: disolver 1.0 g de muestra en 50 ml de agua desionizada. 
Solución de sulfato de hidrazina: disolver 1 g de sulfato de hidrazina en agua desionizada y diluir a 100 ml con el mismo disolvente. Dejar reposar durante 4 a 6 horas. 
Solución de hexametilentetramina: disolver 2.5 g de hexametilentetramina en 25 ml de agua en un matraz con cierre esmerilado. 
Suspensión opalescente primaria: a la solución de hexametilentetramina añadir 25 ml de solución de sulfato de hidrazina. Mezclar y dejar reposar durante 24 h. Esta suspensión es estable durante 2 meses. 
Suspensión opalescente estándar: diluir 15 ml de la suspensión opalescente primaria en 1000 ml de agua. La solución se debe preparar recientemente y solo se puede guardar un máximo de 24 h. 
Referencia I: en un matraz de 100 ml con cierre esmerilado, diluir 5 ml. de la suspensión opalescente estándar a 100 ml con agua. 

La solución problema debe mostrar el mismo aspecto que el agua y su opalescencia no debe ser mayor a la de la referencia I. 

Acidez o alcalinidad: (Farmacopea Europea, 1997) 
Disolver 0.2 g de problema en 10 ml de agua desionizada previamente hervida. Añadir 0.2 ml de NaOH 0.01N. El pH no debe ser menor de 4.7. 
Añadir 0.4 ml. de HCl 0.01N: el pH resultante no debe ser mayor que 4.7. 

2,6-Dimetilanilida: (Farmacopea Europea, 1997) 
Disolver 0.5 g de problema en metanol y diluir a 10 ml con el mismo disolvente. A 2 ml de esta solución añadir 1 ml de una solución recientemente preparada de dimetilaminobenzaldehido en metanol y 2 ml de ácido acético glacial. Dejar reposar durante 10 minutos. 

El color amarillo que pueda desarrollar la solución problema no debe ser más intenso que el de un estándar preparado al mismo tiempo y de la misma manera utilizando 2 ml de una solución de 5 mg/litro de 2,6-dimetilanilina en solución (100 ppm). 

Metales pesados: (Farmacopea Europea, 1997) 
Disolver 2.0 g de muestra en 20 ml de agua:metanol (15:85). Diluir a 20 ml con el mismo disolvente (solución A). A 12 ml de la solución A añadir 2 ml de una solución de buffer acetato pH = 3.5 y añadir 1.2 ml de reactivo de tioacetamina. Mezclar inmediatamente. 
Preparar un estándar con 10 ml de 1 ppm de solución de plomo y 2 ml de solución A. Añadir 2 ml de solución buffer y 1.2 ml de reactivo de tioacetamida 
Finalmente, preparar un blanco con 10 ml del disolvente empleado (metanol:agua), añadir 2 ml de solución A, 2 ml  de buffer y 1.2 ml de solución de tioacetamida. 

A los dos minutos cualquier color pardo desarrollado por la muestra no debe ser más intenso que el producido por el estándar. 

Pérdida por desecación: (USP 23) 
En un pesasubstancias (A) pesar aproximadamente 1 g de muestra exactament pesada (B). LLevar a una estufa termoregulada a 105ºC durante 24 horas sin cubrir. 
Enfriar en un desecador dutante 15 minutos y pesar (C) 

Cálculo:  Pérdida por desecación (%) =  B-C x 100 
                                                      B-A 

Isopropanol residual (Farmacopea Europea) 
Procedimiento: HP-5890 
  

Precolumna	vidrio con lana de vidrio silanizada
Columna	6 ft Tenax GC, 60/80
Condiciones	Ti = 110º C
	Ti = 7 min
	Incremento = 10ºC/min
	T inj =: 190ºC
	Tdet = 190ºC
	Temperatura maxima del horno = 225ºC
	Rango = 5
	Attenuación = 0

Integrador : HP-3390 
 

Zero = 10	Attenuación = 3
CHT.SP = 0.5	Ar.Rej = 0
THRSH = 3	PK WD = 0.16

Muestra: solución al 10% en agua 
Estándar: llevar 0. 1 ml de isopropanol a un matraz aforado de 50 ml y enrasar con agua desionizada (Sol.A). Transferir 5 ml de esta soluciòn a un matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua desionizada.
Procedimiento: inyectar volúmenes iguales (unos 5 ml de las soluciones muestra y estándar en el cromatógrafo de gases. Medir las respuestas en los cromatogramas.
Cálculos: ppm isopropanol :  Am/Ap x 1000,  
donde  Am = área bajo el pico de la muestra 
           As = área bajo el pico del estándar 

2,6-dimetilanilina y otras impurezas de síntesis:  

Se determinan por cromatografía líquido-líquido de alta presión en las siguientes condiciones experimentales: 

Soluciones:   

• solución problema: 0.1 g de muestra en 5 ml de fase móvil. >
• solución de 2,6-dibromohexanoil-2,6-dimetilanilina (B): 0.01 g en 10 ml de fase móvil.
• solución de 2,6-dimetilanilina (C): 0.02 g en 10 ml de fase móvil
• solución de referencia: 0.1 g de IQB-9302.HCl + 0.5 ml de solución B (0.5%) + 0.05 ml de solución D (0.1%) en 5 ml de fase móvil.

• flujo: 1.5 ml
• B = 0; C= 0
• Stop: 25 min
• Post: 0.5 m
• Filtro : 2 (230 nm)

Cálculos:   

% de dimetilanilina =  % area dimetilanilina/ 7.8 
% de 2,6-dibromohexanoil-2,6-dimetilanilina: % area 2,6DBr-2,6DMA/1.5 
% otras impurezas = % otras áreas 
 

VALIDACION DE LOS MÉTODOS ANALITICOS 

El método potenciométrico de valoración del IQB-9302.HCl ha sido validado por LEBSA, el fabricante de la materia prima (Véase DMF pag 38 a 40) 

En resumen: 
El método es lineal entre un 80% y 120% de un estándar de producto 
El método es repetitivo con un coeficiente de variación del 0.098% 
El método es reproducible con un coficiente de variación del 0.060% 
La precisión del método alcanza el 100.22% 

ESTUDIO DE LA ESTABILIDAD DE LA MATERIA PRIMA. 

Debido a la situación del proyecto de desarrollo del IQB-9302.HCl y de que se dispone de lotes de fabricación piloto solo desde hace pocos meses, no existe todavía un estudio de estabilidad de acuerdo con las recomendaciones de la guía de la EMEA CPMP/ICH/380/95 Jan, 1993. Se encuentran en curso sendos estudios (uno acelerado a 40ºC y HR del 75% y otro normal a 25ºC y HR del 75%). 

Sin embargo, se disponen de los siguientes datos: 
1º Varios lotes de laboratorio de IQB-9302.HCl preparados en 1994 no han mostrado degradación aparente. Sin embargo, dado que los análisis iniciales no fueron realizados mediante un método validado, este dato sólo se toma como orientativo. 
2º El fabricante LEBSA ha sometido muestras de IQB-9302.HCl a condiciones extremas (Véase DMF pág 47-48) 

• 24 horas en agua con agitación
• 24 horas a reflujo en agua
• 24 horas  en HCl 0.1 N con agitación
• 24 horas a reflujo en HCl 0.1N
• 24 horas en NAOH 0.1 con agitación
• 24 horas a reflujo en NaOH 0.1 N
• 24 horas bajo luz UV (254 nm)

Cuando se mantiene una muestra de 1 g de IQB-9302.HCl a 100ºC durante 2 meses se observa un 3.23% de degración. 
A la temperatura de fusión (230ºC) durante 30 minutos se observa una importante degradación (89%). El principal producto de degradación en estas condiciones es la 2.6-dimetilanilida.
3º Sin excepción, todas las amidas anestésicas locales químicamente emparentadas con el IQB-9302 (bupivacaina,  ropivacaína y mepivacaína) son sumamente estables, resistiendo el autoclavado en solución y teniendo una fecha de caducidad de 5 años. 

Estos datos serán completados con los resultados de los estudios en curso e incluídos en la próxima version del PEI.